2018年02月11日

血清是细胞培养中最重要的元素之一。以下是实验操作中里常会遇到的问题，在此分享，仅供参考。

保存血清最好的方法？

 我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。需要长期保存的血清必须储存于-20℃至–70℃低温冰箱中。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。由于血清结冰时体积会增加约10％，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

如何解冻血清才不会使产品质量受损?

我们建议您采用逐步解冻法：将-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清取出后先置于2℃-8℃冰箱中使之融解，然后移入室温待全部溶解后再分装。在溶解过程中需轻轻规则地摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

尽量避免沉淀物的产生的步骤：

①解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，非常容易产生沉淀物。 

②解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 

③请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。 

④血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 

⑤若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?

血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成的，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血渭解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物并不影响血清本身的质量。

若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。

血清是否一定要灭活？

经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。

经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误认为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
因此建议若非必须，可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省宝贵的时间，更确保血清的质量！

几种常见血清之间的区别

小牛血清和胎牛血清：

（1） 来源不同——胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛（小牛）血清（Calf serum, CS）采自出生10至14 天的小牛。

（2）组份与比例不同——两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同；

（3）用途与用法不同——某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。

新生牛血清：新出生牛5天内取血制成  
小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。  
胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。 

国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。  

根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：  

（1）.特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU， 血红蛋白含量≤10mg/dl。  
（2）.优等胎牛血清：经过3次100纳米过滤，内毒素含量≤25EU/ml，血红蛋白含量≤25mg/ml。
（3）.标准胎牛血清：3次100纳米过滤，低内毒素， 低血红蛋白含量。  
（4）.活性碳/葡聚糖处理血清：激素含量大大降低。  
（5）.透析型胎牛血清：次黄嘌呤和胸腺核苷含量大大降低。